कम गति सेंट्रीफ्यूज

A कम गति अपकेंद्रणएक नमूने में विभिन्न घनत्वों के घटकों को अलग करने वाले केन्द्रापसारक बल बनाने के लिए स्पिन। सेल पृथक्करण के दौरान, कोशिकाओं, सेल टुकड़े, और अन्य बायोमोलेक्यूलस को उनके द्रव्यमान और घनत्व के आधार पर, केन्द्रापसारक बल द्वारा अलग -अलग स्थानों में अलग किया जाता है। विशेष रूप से, जब नमूना ट्यूब को सेंट्रीफ्यूज रोटर के अंदर उच्च गति पर घुमाया जाता है, तो मिश्रण के विभिन्न घटकों पर केन्द्रापसारक बल उनके द्रव्यमान के लिए आनुपातिक है, और रोटेशन की गति और त्रिज्या से भी प्रभावित होता है। बड़ी कोशिकाओं या कणों को सेंट्रीफ्यूज ट्यूब के नीचे की ओर फेंक दिया जाता है, जबकि छोटे घटक ऊपरी परत में रहते हैं। घनत्व और द्रव्यमान के आधार पर पृथक्करण का यह सिद्धांत कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज को सेल पृथक्करण के लिए एक आदर्श उपकरण बनाता है।

● सही सेंट्रीफ्यूगल गति और समय का चयन: गति और समय की पसंद सेल पृथक्करण की प्रभावशीलता के लिए महत्वपूर्ण है। बहुत अधिक घूर्णी गति से सेल टूटना या क्षति हो सकती है, जबकि बहुत लंबे समय से सेल एकत्रीकरण या अपूर्ण वर्षा हो सकती है। इसलिए, केन्द्रापसारक मापदंडों के चयन को कोशिकाओं के प्रकार, आकार और घनत्व के अनुसार माना जाना चाहिए।
● नमूना संतुलन सुनिश्चित करें: नमूना संतुलन संचालन के दौरान वाइब्रेशन और शोर उत्पन्न करने से अपकेंद्रित्र को रोकने के लिए कुंजी है। नमूने रखते समय, यह सुनिश्चित करना आवश्यक है कि सभी अपकेंद्रित्र ट्यूबों में नमूने समान या समान द्रव्यमान के होते हैं। यदि नमूना गुणवत्ता में एक बड़ा अंतर है, तो संतुलन प्राप्त करने के लिए हल्के अपकेंद्रित्र ट्यूब में बफर या सामान्य खारा की एक उचित मात्रा जोड़ी जा सकती है।
● सही सेंट्रीफ्यूज ट्यूब का चयन करें: सेंट्रीफ्यूज ट्यूब की गुणवत्ता और जकड़न का भी सेल पृथक्करण की प्रभावशीलता पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है। उच्च गुणवत्ता वाले केन्द्रापसारक ट्यूबों में अच्छी सीलिंग और संक्षारण प्रतिरोध होता है, जो प्रभावी रूप से नमूना रिसाव और संदूषण को रोक सकता है। इसी समय, केन्द्रापसारक ट्यूब के विनिर्देश को भी नमूने की मात्रा और आवश्यक केन्द्रापसारक बल के अनुसार चुना जाना चाहिए।
● सेंट्रीफ्यूज के रखरखाव और रखरखाव पर ध्यान दें: नमूना अवशिष्ट संदूषण को रोकने के लिए नियमित रूप से केन्द्रापसारक कक्ष और सेंट्रीफ्यूज के रोटर को साफ करें। तरल अवशेषों के कारण जंग से बचने के लिए उपयोग के बाद समय में साफ पोंछें। इसी समय, यह सुनिश्चित करने के लिए कि वे बरकरार हैं और सुरक्षा के खतरों से बचने के लिए पावर कॉर्ड और प्लग और सेंट्रीफ्यूज के अन्य घटकों की नियमित रूप से जांच करना भी आवश्यक है।

● आनुवंशिक इंजीनियरिंग में सेल उपचार: आनुवंशिक इंजीनियरिंग में, कोशिकाओं को अक्सर सुसंस्कृत, ट्रांसफ़ेक्ट, जांच और अन्य उपचारों की आवश्यकता होती है। कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज का उपयोग सेल निलंबन की एकाग्रता और धुलाई जैसे चरणों के लिए किया जा सकता है, साथ ही अभिकर्मक के बाद कोशिकाओं का संग्रह भी। सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा, सेल कल्चर माध्यम में अशुद्धियों और अनियंत्रित कोशिकाओं को हटाया जा सकता है, और जीन अभिकर्मक की दक्षता और शुद्धता में सुधार किया जा सकता है।
● प्रोटीन शुद्धि और अलगाव: प्रोटीन अनुसंधान में, विशिष्ट प्रोटीन को जटिल जैविक नमूनों से शुद्ध करने की आवश्यकता है। कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज का उपयोग प्रोटीन समाधानों के प्रारंभिक स्पष्टीकरण और अशुद्धियों को हटाने के लिए किया जा सकता है, जैसे कि सेल मलबे, न्यूक्लिक एसिड, आदि सेंट्रीफ्यूगल उपचार द्वारा, एक अपेक्षाकृत शुद्ध प्रोटीन समाधान प्राप्त किया जा सकता है, जो बाद के शुद्धिकरण चरणों के लिए आधार प्रदान करता है।
● वायरस कणों का अलगाव और शुद्धि: वायरस कणों में आमतौर पर एक विशिष्ट घनत्व और आकार होता है और इसे कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज द्वारा अलग और शुद्ध किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, वायरोलॉजी अनुसंधान में, वायरल कणों को अंतर सेंट्रीफ्यूजेशन का उपयोग करके सेल संस्कृतियों से अलग किया जा सकता है। यह विधि अन्य सेलुलर घटकों से वायरल कणों को अलग करने के लिए विभिन्न गति से केन्द्रापसारक बलों में अंतर का लाभ उठाती है।
● बायोलॉजिकल दवाओं का उत्पादन और गुणवत्ता नियंत्रण: बायोलॉजिकल दवाओं की उत्पादन प्रक्रिया में, कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज का उपयोग अक्सर सेल संस्कृति द्रव के स्पष्टीकरण, सेल मलबे को हटाने और दवा उत्पादों के प्रारंभिक पृथक्करण के लिए किया जाता है। इसके अलावा, दवाओं के गुणवत्ता नियंत्रण में, कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज का उपयोग दवा कणों के आकार वितरण और स्थिरता जैसे प्रमुख संकेतकों का पता लगाने के लिए भी किया जा सकता है।

◇ प्राथमिक पृथक्करण: कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज का उपयोग अक्सर वायरस कणों के प्राथमिक पृथक्करण के लिए किया जाता है। वायरस निष्कर्षण की प्रक्रिया में, सेल के टुकड़े और अशुद्धियों जैसे बड़े कणों को कम गति वाले सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा हटाया जा सकता है, और अपेक्षाकृत शुद्ध वायरस निलंबन प्राप्त किया जा सकता है। यह कदम बाद के शुद्धिकरण चरणों की सुविधा प्रदान करता है।
◇ वायरस संवर्धन: कुछ मामलों में, कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज का उपयोग वायरस संवर्धन के लिए भी किया जा सकता है। अपकेंद्रित्र समय और गति को समायोजित करके, वायरस कणों को अपकेंद्रित्र ट्यूब के तल पर जमा किया जा सकता है, ताकि सतह पर तैरनेवाला निकालकर केंद्रित वायरस का नमूना प्राप्त किया जा सके। हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि कम गति वाले सेंट्रीफ्यूज का संवर्धन प्रभाव अपेक्षाकृत सीमित है, और ऐसे अवसरों के लिए जहां उच्च-शुद्धता वाले वायरस की आवश्यकता होती है, अन्य शुद्धिकरण विधियों की आवश्यकता होती है।

 

● अंतर केन्द्रापसारक विधि: डिफरेंशियल सेंट्रीफ्यूगल मेथड विभिन्न गति और केन्द्रापसारक समय का उपयोग करके विभिन्न आकारों और घनत्वों के कणों को अलग करने की एक विधि है। विभेदक सेंट्रीफ्यूजेशन का उपयोग अक्सर अशुद्धियों को दूर करने और वायरस शुद्धि के दौरान वायरस को केंद्रित करने के लिए किया जाता है। कम गति सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा ऑर्गेनेल जैसे बड़े कणों को हटाने के बाद, वायरस कणों को उच्च गति सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अवक्षेपित किया जाता है।
● घनत्व ढाल सेंट्रीफ्यूजेशन विधि: घनत्व ग्रेडिएंट सेंट्रीफ्यूजेशन विधि एक ढाल बनाने के लिए विभिन्न घनत्वों के मीडिया का उपयोग है, ताकि विभिन्न घनत्वों के कण ढाल विधि में विभिन्न पदों पर व्यवस्थित हों। वायरस शुद्धि में, घनत्व ढाल सेंट्रीफ्यूजेशन का उपयोग अक्सर वायरस कणों को समान घनत्व (जैसे प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड, आदि) की अन्य अशुद्धियों से अलग करने के लिए किया जाता है। अग्रिम में अपकेंद्रित्र ट्यूब में घनत्व ढाल तैयार करके, और फिर सेंट्रीफ्यूजेशन के लिए ढाल की सतह पर वायरस निलंबन जोड़कर, वायरस कण एक अवसादन क्षेत्र बनाने के लिए ढाल में एक विशिष्ट स्थिति में बस जाएंगे।
● वर्षा विधि: वर्षा की विधि रासायनिक अभिकर्मकों को जोड़कर वायरस के कणों को बढ़ावा देना है। सामान्य अवक्षेपण एजेंटों में अमोनियम सल्फेट, पॉलीइथाइलीन ग्लाइकोल (पीईजी), आदि शामिल हैं। वायरस के आगे शुद्धि के लिए वर्षा विधि का उपयोग किया जा सकता है। अवक्षेपक की एकाग्रता और पीएच मान को समायोजित करके, वायरस कणों को अशुद्धियों को हटाने के लिए चुनिंदा रूप से अवक्षेपित किया जा सकता है।
● निस्पंदन विधि: निस्पंदन विधि जेल निस्पंदन क्रोमैटोग्राफी कॉलम द्वारा अन्य अशुद्धियों से वायरस कणों को अलग करने की एक विधि है। जेल फ़िल्टर क्रोमैटोग्राफिक कॉलम को कण आकार के अनुसार अलग किया जाता है, और बड़े अणु पहले क्रोमैटोग्राफिक कॉलम से बाहर निकलते हैं, और बाद में छोटे अणु बहते हैं। उपयुक्त जेल और क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों का चयन करके, वायरस कणों को प्रभावी रूप से अन्य अशुद्धियों से अलग किया जा सकता है।
● इलेक्ट्रोफोरेटिक विधि: इलेक्ट्रोफोरेटिक विधि विद्युत क्षेत्र माइग्रेशन विधि में चार्ज कण बनाने के लिए विद्युत क्षेत्र कार्रवाई का उपयोग है। वायरस शुद्धि में, वैद्युतकणसंचलन का उपयोग अक्सर वायरल कणों को अन्य चार्ज किए गए अशुद्धियों से अलग करने के लिए किया जाता है। वायरस कणों के कुशल पृथक्करण और शुद्धि को उपयुक्त वैद्युतकणसंचलन स्थितियों और मीडिया का चयन करके प्राप्त किया जा सकता है।

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