कम दबाव क्रोमैटोग्राफी स्तंभ
2.क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (रोटेशन प्रकार)
3. क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (मैनुअल)
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विवरण
तकनीकी पैरामीटर
कम दबाव क्रोमैटोग्राफी स्तंभतरल क्रोमैटोग्राफी प्रौद्योगिकी में प्रमुख घटक हैं, व्यापक रूप से जैव रसायन, बायोफार्मास्यूटिकल्स, जैव प्रौद्योगिकी और अन्य क्षेत्रों में उपयोग किए जाने वाले अन्य क्षेत्रों में उपयोग किए जाते हैं जिन्हें पदार्थों के पृथक्करण और शुद्धि की आवश्यकता होती है। तरल क्रोमैटोग्राफी प्रौद्योगिकी के एक महत्वपूर्ण घटक के रूप में, यह जैव रसायन, बायोफार्मास्यूटिकल्स और जैव प्रौद्योगिकी जैसे क्षेत्रों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। उपयुक्त भराव का चयन करके, पृथक्करण की स्थिति का अनुकूलन, और उचित संचालन और रखरखाव, विभिन्न प्रकार के यौगिकों के प्रभावी पृथक्करण और शुद्धि को प्राप्त किया जा सकता है। नए भराव के विकास के साथ, बुद्धिमान प्रौद्योगिकी के अनुप्रयोग, और बहुक्रियाशील एकीकरण की प्राप्ति, कम दबाव वाले चोमाटोग्राफी कोलन की प्रदर्शन और अनुप्रयोग सीमा का विस्तार और सुधार जारी रहेगा।
पैरामीटर
मूलरूप आदर्श
क्रोमैटोग्राफिक कॉलम क्रोमैटोग्राफिक तकनीक का मुख्य घटक है, और इसका कार्य सिद्धांत मुख्य रूप से पदार्थ अणुओं और क्रोमैटोग्राफिक कॉलम पैकिंग सामग्री (जिसे स्थिर चरण के रूप में भी जाना जाता है) के बीच बातचीत में अंतर पर आधारित है। जब नमूना क्रोमैटोग्राफिक कोलुन से होकर गुजरता है, तो विभिन्न पदार्थ अणुओं और स्थिर चरण के बीच आत्मीयता भिन्न होती है, जिसके परिणामस्वरूप कोलुन में अलग -अलग निवास समय होता है, इस प्रकार पृथक्करण प्राप्त होता है। यह पृथक्करण प्रक्रिया मोबाइल चरण (गैस या तरल) और वाहक गैस के प्रणोदन के तहत स्थिर चरण के बीच नमूना घटकों को बार -बार वितरित करके प्राप्त की जाती है। कम दबाव वाले क्रोमैटोग्राफी में, मोबाइल चरण आमतौर पर कम दबाव में chomatography colun से गुजरता है, जिससे पृथक्करण प्रक्रिया चिकनी और अधिक नियंत्रणीय हो जाती है।
संरचना और प्रकार
कम दबाव क्रोमैटोग्राफी स्तंभआमतौर पर तीन भागों से बने होते हैं: कॉलम ट्यूब, कॉलम हेड और पैकिंग। कोलुन ट्यूब एक क्रोमैटोग्राफिक कोलुन का मुख्य हिस्सा है, जो आमतौर पर कांच या बहुलक सामग्री से बना होता है, जिसमें 240440 मिमी की लंबाई और 1040 मिमी का आंतरिक व्यास होता है। कोलुन हेड कॉलम ट्यूब के दोनों सिरों पर स्थित है और इसका उपयोग इन्फ्यूजन पंप, इंजेक्शन वाल्व और डिटेक्टरों जैसे घटकों को जोड़ने के लिए किया जाता है। पैकिंग सामग्री क्रोमैटोग्राफिक कोलुन का मुख्य भाग है, जो स्तंभ के पृथक्करण प्रदर्शन और प्रयोज्यता को निर्धारित करता है।
उनके अलग-अलग उपयोगों के अनुसार, कम दबाव वाले क्रोमैटोगी कॉलम को विश्लेषणात्मक क्रोमैटोग्रफी कोलन और तैयारी क्रोमैटोगी कॉलम में विभाजित किया जा सकता है। विश्लेषणात्मक क्रोमैटोग्रफी कोलन मुख्य रूप से नमूना विश्लेषण और पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है, उच्च कोलुन दक्षता और अच्छे पृथक्करण के साथ, लेकिन छोटे प्रसंस्करण क्षमता के साथ। बड़ी प्रसंस्करण क्षमता और उच्च पृथक्करण दक्षता के साथ, नमूना तैयार करने और शुद्धिकरण के लिए तैयारी क्रोमैटोग्रफी कोलन का उपयोग किया जाता है, लेकिन कोलुन दक्षता और पृथक्करण की डिग्री विश्लेषणात्मक क्रोमैटोग्रफी कॉलमों से थोड़ी कम हो सकती है।
पैकिंग के लिए सामग्री
पैकिंग कम दबाव वाले चोमाटोग्राफी कॉलम में एक प्रमुख घटक है, जो स्तंभ के पृथक्करण प्रदर्शन और प्रयोज्यता को निर्धारित करता है। कम दबाव वाले क्रोमैटोग्रफी कोलन की पैकिंग आमतौर पर पेक्टिन, एग्रोज़, सेल्यूलोज, सिंथेटिक पॉलिमर, या आयन एक्सचेंजर्स जैसे नरम सामग्री से बनाई जाती है, 4060 μ मीटर के कण आकार के साथ (कुछ साहित्य में 40130 μ मीटर की एक कण आकार की सीमा भी है। )। इन भराव में अलग -अलग भौतिक और रासायनिक गुण होते हैं, जैसे कि ध्रुवीयता, हाइड्रोफोबिसिटी, चार्ज, आदि, और अलगाव को प्राप्त करने के लिए विभिन्न तरीकों से नमूना अणुओं के साथ बातचीत कर सकते हैं।
कम दबाव वाले क्रोमैटोगी कोलन की पृथक्करण दक्षता के लिए भराव का चयन महत्वपूर्ण है। विभिन्न भराव विभिन्न प्रकार के नमूनों और पृथक्करण आवश्यकताओं के लिए उपयुक्त हैं। उदाहरण के लिए, प्राकृतिक पॉलीसेकेराइड भराव जैसे पेक्टिन और agarose बायोमोलेक्यूलस के पृथक्करण और शुद्धि के लिए उपयुक्त हैं; सेल्यूलोज आधारित भराव कार्बनिक छोटे अणु यौगिकों के पृथक्करण के लिए उपयुक्त हैं; सिंथेटिक पॉलिमर फिलर्स में प्रयोज्यता की एक विस्तृत श्रृंखला होती है और इसका उपयोग विभिन्न प्रकार के यौगिकों को अलग करने के लिए किया जा सकता है।
तुलना करना
कम दबाव वाले क्रोमैटोगी कॉलम की विशेषताओं और लाभों की अधिक व्यापक समझ हासिल करने के लिए, हम उनकी तुलना उच्च दबाव वाले तरल क्रोमैटोगी कॉलम के साथ कर सकते हैं।
(1) ऑपरेटिंग दबाव:
कम दबाव वाले क्रोमैटोगी कॉलम का परिचालन दबाव अपेक्षाकृत कम होता है, आम तौर पर 1 0 1000 psi (0.770 बार) की सीमा के भीतर; उच्च दबाव वाले तरल क्रोमैटोगी कॉलम का ऑपरेटिंग दबाव अपेक्षाकृत अधिक है, आमतौर पर 2000 पीएसआई (140 बार) से ऊपर के दबाव में किया जाता है। यह कम दबाव वाले chomatography कॉलम को ऑपरेशन के दौरान अधिक स्थिर और नियंत्रणीय बनाता है, जिससे इंस्ट्रूमेंट क्षति के जोखिम को कम किया जाता है।
(२) पृथक्करण दक्षता:
यद्यपि उच्च दबाव वाले तरल क्रोमैटोग्रफी कॉलम में उच्च पृथक्करण दक्षता होती है, कम दबाव वाले क्रोमैटोगी कॉलम में बड़े अणु यौगिकों और प्राकृतिक उत्पादों को अलग करने में अद्वितीय लाभ होते हैं। इसके अलावा, कम दबाव वाले क्रोमैटोगी कॉलम अधिक लागत-प्रभावी, संचालित करने में आसान, और लचीले होते हैं, जिससे वे प्रयोगशाला और औद्योगिक पैमाने के जैविक उत्पाद प्रसंस्करण जैसे क्षेत्रों के लिए उपयुक्त होते हैं।
(3) इंस्ट्रूमेंट कॉन्फ़िगरेशन आवश्यकताएँ:
उच्च दबाव वाले तरल क्रोमैटोग्रफी कॉलम को उच्च-सटीक घटकों जैसे कि उच्च दबाव वाले जलसेक पंप और उच्च दबाव वाले इंजेक्शन वाल्व से लैस करने की आवश्यकता होती है ताकि उनके सामान्य संचालन को सुनिश्चित किया जा सके; इसमें इंस्ट्रूमेंट कॉन्फ़िगरेशन के लिए कम आवश्यकताएं हैं और इसे पेरिस्टाल्टिक पंप जैसे सरल घटकों द्वारा संचालित किया जा सकता है। यह उपकरण खरीद और रखरखाव के संदर्भ में कम दबाव वाले क्रोमैटोगी कॉलम को अधिक लागत-प्रभावी बनाता है।
(४) आवेदन का दायरा:
कम दबाव क्रोमैटोग्राफी स्तंभप्राकृतिक उत्पादों, प्रोटीनों, न्यूक्लिक एसिड, पेप्टाइड्स और अन्य बायोमोलेक्यूलस, साथ ही कार्बनिक छोटे अणु यौगिकों को अलग करने और शुद्ध करने के लिए उपयुक्त हैं; उच्च दबाव तरल क्रोमैटोगी कॉलम उन क्षेत्रों के लिए अधिक उपयुक्त हैं जिनके लिए उच्च पृथक्करण दक्षता और ट्रेस घटकों के पृथक्करण की आवश्यकता होती है, जैसे कि दवा विश्लेषण और पर्यावरण निगरानी।
संचालन और रखरखाव
प्रदर्शन को बनाए रखने और कम दबाव वाले क्रोमैटोगी कॉलम के सेवा जीवन का विस्तार करने के लिए उचित संचालन और रखरखाव महत्वपूर्ण है। यहाँ कुछ प्रमुख परिचालन और रखरखाव की सिफारिशें हैं:
ऑपरेशन से पहले तैयारी:
क्रोमैटोग्राफिक कॉलम और लिक्विड क्रोमैटोग्राफी इंस्ट्रूमेंट के बीच सही कनेक्शन सुनिश्चित करें।
जांचें कि मोबाइल चरण की रचना और पीएच मूल्य आवश्यकताओं को पूरा करते हैं या नहीं।
अवशेषों को हटाने के लिए एक उपयुक्त विलायक के साथ chomatography कॉलम को कुल्ला।
नमूना प्रसंस्करण:
सुनिश्चित करें कि नमूना अशुद्धियों और कणों को हटाने के लिए इंजेक्शन से पहले, निस्पंदन, सेंट्रीफ्यूजेशन, आदि जैसे उचित दिखावा कर चुका है।
ओवरलोडिंग से बचने के लिए नमूना की इंजेक्शन की मात्रा और एकाग्रता को नियंत्रित करें जिससे कॉलम प्रदर्शन में कमी हो सकती है।
मोबाइल चरण नियंत्रण:
यह सुनिश्चित करने के लिए मोबाइल चरण के प्रवाह दर और दबाव की निगरानी करें कि वे निर्दिष्ट सीमा के भीतर हैं।
संदूषण और गिरावट से बचने के लिए नियमित रूप से मोबाइल चरण की रचना और स्थिरता की जांच करें।
तापमान नियंत्रण:
पृथक्करण दक्षता पर थर्मल प्रभाव के प्रभाव को कम करने के लिए क्रोमैटोग्राफिक कॉलम और मोबाइल चरण के तापमान को नियंत्रित करें।
तापमान में उतार -चढ़ाव के कारण अस्थिर पृथक्करण से बचने के लिए तापमान नियंत्रण प्रणाली की स्थिरता और विश्वसनीयता सुनिश्चित करें।
सफाई और उत्थान:
अवशेषों और दूषित पदार्थों को हटाने के लिए उपयुक्त सॉल्वैंट्स के साथ नियमित रूप से Chomatography कॉलम को साफ करें।
क्रोमैटोगी कॉलम के लिए जो लंबे समय से उपयोग नहीं किए गए हैं, उनके प्रदर्शन को बहाल करने के लिए पुनर्जनन उपचार करते हैं।
भंडारण और रखरखाव:
जब उपयोग में नहीं होता है, तो एक उपयुक्त विलायक के साथ chomatography कॉलम भरें और इसे उचित तापमान पर संग्रहीत करें।
नियमित रूप से Chomatography कॉलम की स्थिति और प्रदर्शन की जांच करें, और समय पर क्षतिग्रस्त या वृद्ध घटकों को बदल दें।
रिकॉर्डिंग और विश्लेषण:
प्रत्येक प्रयोग के लिए ऑपरेटिंग स्थितियों, पृथक्करण दक्षता और क्रोमैटोग्राफिक कॉलम स्थिति को रिकॉर्ड करें।
प्रयोगात्मक डेटा का विश्लेषण करें, क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के प्रदर्शन में परिवर्तन का मूल्यांकन करें, और समायोजन और अनुकूलन के लिए समय पर उपाय करें।
केस विश्लेषण
अलग-अलग क्षेत्रों में कम दबाव वाले चोमाटोग्राफी कॉलम के आवेदन प्रभावों को प्रदर्शित करने के उद्देश्य से, पृथक्करण और शुद्धि के लिए कम दबाव वाले चोमाटोग्राफी कॉलम का उपयोग करने के कुछ केस स्टडी निम्नलिखित हैं:
(1) प्रोटीन पृथक्करण:
आयन एक्सचेंज Chomatography कॉलम का उपयोग करके प्रोटीन मिश्रण को अलग करें। मोबाइल चरण के पीएच और आयनिक शक्ति को समायोजित करके, विभिन्न प्रोटीनों के चयनात्मक पृथक्करण को प्राप्त किया गया था।
प्रोटीन के आणविक भार को जेल निस्पंदन chomatography कॉलम द्वारा जांचा गया था। विभिन्न प्रोटीनों को उनके आणविक भार के आधार पर अलग और शुद्ध किया गया।
(२) न्यूक्लिक एसिड अलगाव:
न्यूक्लिक एसिड के विशिष्ट पृथक्करण के लिए आत्मीयता chomatography कॉलम का उपयोग करें। विशिष्ट लिगेंड्स को पेश करके, विशिष्ट न्यूक्लिक एसिड अनुक्रमों के चयनात्मक बंधन और पृथक्करण को प्राप्त किया गया है।
न्यूक्लिक एसिड मिश्रण को अशुद्धियों और प्रदूषकों को हटाने के लिए आयन एक्सचेंज या जेल निस्पंदन chomatography कॉलम द्वारा शुद्ध किया जाता है।
(3) छोटे अणु यौगिकों का पृथक्करण:
एक रिवर्स चरण चोमाटोग्राफी कॉलम का उपयोग करके छोटे अणु यौगिकों को अलग करें। मोबाइल चरण की रचना और ध्रुवीयता को समायोजित करके, विभिन्न ध्रुवों के साथ छोटे अणु यौगिकों के पृथक्करण को प्राप्त किया गया था।
एक सामान्य चरण chomatography कॉलम का उपयोग करके विशिष्ट कार्यात्मक समूहों के साथ छोटे अणु यौगिकों का चयनात्मक पृथक्करण।
(४) प्राकृतिक उत्पाद पृथक्करण:
कम दबाव वाले क्रोमैटोग्राह कॉलम का उपयोग करके पौधे के अर्क में सक्रिय अवयवों का पृथक्करण और शुद्धि। पृथक्करण की स्थिति का अनुकूलन करके और उपयुक्त भराव का चयन करके, जैविक रूप से सक्रिय यौगिकों को सफलतापूर्वक निकाला गया।
माइक्रोबियल किण्वन शोरबा में मेटाबोलाइट्स के पृथक्करण और पहचान के लिए कम दबाव वाले चोमाटोग्राफी कॉलम का उपयोग नई दवा विकास के लिए उम्मीदवार अणु प्रदान करता है।
ये केस स्टडी व्यापक अनुप्रयोग और अच्छे प्रदर्शन को प्रदर्शित करते हैंकम दबाव क्रोमैटोग्राफी स्तंभविभिन्न क्षेत्रों में। उपयुक्त क्रोमैटोग्राफिक कॉलम का चयन करके और पृथक्करण की स्थिति का अनुकूलन करके, विभिन्न प्रकार के यौगिकों के प्रभावी पृथक्करण और शुद्धि को प्राप्त किया जा सकता है।
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