लघु स्तंभ क्रोमैटोग्राफी
2.क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (रोटेशन प्रकार)
3. क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (मैनुअल)
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विवरण
तकनीकी पैरामीटर
पारंपरिक स्तंभ क्रोमैटोग्राफी के साथ तुलना में,लघु स्तंभ क्रोमैटोग्राफीतेजी से पृथक्करण गति, उच्च पृथक्करण दक्षता और सरल संचालन के फायदे हैं। हालांकि, इसकी कुछ सीमाएं भी हैं, जैसे कि कुछ विशेष सामग्रियों के लिए एक उपयुक्त निश्चित चरण और मोबाइल चरण पृथक्करण को खोजना मुश्किल हो सकता है। इसे विभिन्न प्रकार के adsorbents के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, जैसे कि सिलिका जेल, एल्यूमिना, सक्रिय कार्बन, आदि। , साथ ही विभिन्न प्रकार के मोबाइल चरण, यह अलगाव और शुद्धि कार्यों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए उपयुक्त है। कम कॉलम की लंबाई के लिए, आवश्यक मोबाइल चरण की मात्रा अपेक्षाकृत छोटी है, इस प्रकार विलायक की खपत को कम करना और अपशिष्ट उत्पादन, पर्यावरण संरक्षण और सतत विकास की अवधारणा के अनुरूप।
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पैरामीटर
स्तंभ स्थापना के लिए चरण
सूखी लोडिंग स्तंभ
एक उपयुक्त कॉलम का चयन करें, जो आमतौर पर कांच या plexiglass से बना होता है और तेजी से अलगाव की जरूरतों के अनुकूल होने के लिए एक छोटी लंबाई होती है।
यह सुनिश्चित करने के लिए कि पृथक्करण प्रभाव में सुधार करने के लिए इसका कण आकार एक समान है, के लिए शुष्क स्थिर चरण (जैसे सिलिका जेल, एल्यूमिना, आदि) की एक उचित मात्रा तैयार करें।
कॉलम के शीर्ष पर एक फ़नल को समान रूप से स्तंभ में स्थिर चरण डालने के लिए रखा जाता है।
सूखी स्थिर चरण धीरे -धीरे और लगातार एक फ़नल के माध्यम से स्तंभ में डाला जाता है, जबकि धीरे से स्तंभ की साइड दीवार को टैप करते हुए, ताकि स्थिर चरण को कसकर और समान रूप से स्तंभ में भरा जा सके।
भरने की प्रक्रिया में, बुलबुले से बचने के लिए देखभाल की जानी चाहिए, ताकि पृथक्करण प्रभाव को प्रभावित न किया जा सके।
जब निश्चित चरण को आवश्यक ऊंचाई पर लोड किया जाता है, तो इसकी सपाटता और एकरूपता सुनिश्चित करने के लिए एक खुरचनी या सपाट उपकरण के साथ निश्चित चरण की सतह को जोड़ना और खुरचना बंद कर दें।
एक प्राप्त डिवाइस (जैसे कि एक शंक्वाकार बोतल) को एलुएंट को इकट्ठा करने के लिए कॉलम के नीचे से जुड़ा हुआ है।
मोबाइल चरण को जोड़ने से पहले, यह जांचें कि स्थिर चरण कसकर और समान रूप से पैक किया गया है, और यह कि कॉलम में कोई बुलबुले नहीं हैं।
गीला लोडिंग कॉलम
सामग्री तैयार करें:
उपयुक्त कॉलम और स्थिर चरण का चयन करें।
होमोजेनेट बनाने के लिए स्थिर चरण के साथ मिश्रण के लिए मोबाइल चरण (जैसे कार्बनिक विलायक) की उचित मात्रा तैयार करें।
फिक्स्ड चरण और मोबाइल चरण का मिश्रण:
फिक्स्ड चरण को प्रवाह की सही मात्रा के साथ मिलाएं और एक पेस्ट बनाने के लिए हलचल करें।
समरूपता भरना:
मिश्रित होमोजेनेट को धीरे -धीरे और लगातार कॉलम में डाला जाता है, जबकि स्तंभ के नीचे आउटलेट को खोलने के लिए मोबाइल चरण को बाहर प्रवाह करने और निश्चित चरण को धीरे -धीरे कॉलम में बसने के लिए ड्राइव करने की अनुमति देता है।
लोडिंग प्रक्रिया के दौरान, बुलबुले से बचने के लिए भी देखभाल की जानी चाहिए, और स्थिर चरण की समान बस्ती को बढ़ावा देने के लिए कॉलम की साइड दीवार को धीरे से टैप करें।
फ्लैट स्थिर चरण सतह:
जब स्थिर चरण वांछित ऊंचाई पर बस जाता है, तो होमोजेनेट को जोड़ना बंद कर दें और मोबाइल चरण की पूरी तरह से नाली की प्रतीक्षा करें।
इसकी सपाटता और एकरूपता सुनिश्चित करने के लिए एक खुरचनी या सपाट उपकरण के साथ स्थिर चरण की सतह को चिकना करें।
प्राप्त डिवाइस तैयार करें:
एक प्राप्त डिवाइस बाद के एलुएंट संग्रह के लिए कॉलम के नीचे से जुड़ा हुआ है।
जाँच करें और समायोजित करें:
नमूना जोड़ने से पहले, यह जांचें कि स्थिर चरण कसकर और समान रूप से पैक किया गया है और स्तंभ में कोई बुलबुले नहीं हैं।
यदि आवश्यक हो, तो बुलबुले को हटाने और कॉलम को संतुलित करने के लिए फ्लशिंग के लिए एक उचित मात्रा में मोबाइल चरण जोड़ा जा सकता है।
चाहे वह सूखा हो या गीला लोडिंग, क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के पृथक्करण प्रभाव और स्थिरता को सुनिश्चित करने के लिए ऑपरेशन के सामान्यीकरण और सटीकता पर ध्यान देना आवश्यक है। इसी समय, कॉलम लोडिंग प्रक्रिया के दौरान, हमें निश्चित चरण को भरने और कॉलम में बुलबुला स्थिति पर पूरा ध्यान देना चाहिए, और समय पर इसके साथ समायोजित और व्यवहार करना चाहिए।
सफाई मार्गदर्शिका
उपकरणों की सफाई पृथक्करण दक्षता, स्तंभ जीवन और विश्लेषण सटीकता से संबंधित एक महत्वपूर्ण लिंक है। निम्नलिखित लघु स्तंभ क्रोमैटोग्राफी के साथ सफाई के मुद्दों पर गहराई से नज़र है, जिसे सफाई दिशानिर्देशों का एक व्यापक सेट प्रदान करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।
स्वच्छता का महत्व
स्पेक्ट्रम विधि का व्यापक रूप से रासायनिक विश्लेषण, दवा संश्लेषण, पर्यावरण निगरानी और अन्य क्षेत्रों में उपयोग किया जाता है। हालांकि, उपयोग की प्रक्रिया में, स्तंभ विभिन्न अवशेषों और प्रदूषकों से प्रभावित होगा, जिसके परिणामस्वरूप पृथक्करण दक्षता, टेलिंग पीक, स्तंभ रुकावट और अन्य समस्याएं कम हो जाएंगी। इसलिए, नियमित सफाई अलगाव प्रभाव को सुनिश्चित करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपाय है, स्तंभ के सेवा जीवन का विस्तार करें और विश्लेषण सटीकता में सुधार करें।
सफाई से पहले तैयारी
स्तंभ सामग्री और विशेषताओं के बारे में जानें
कॉलम की विभिन्न सामग्रियों (जैसे सिलिका जेल, एल्यूमिना, बहुलक, आदि) में अलग -अलग रासायनिक स्थिरता और विलायक प्रतिरोध होता है। इसलिए, उचित सफाई विलायक और विधि का चयन करने के लिए सफाई से पहले स्तंभ की सामग्री और विशेषताओं को समझना आवश्यक है।
सफाई विलायक तैयार करें
सफाई विलायक का विकल्प नमूना की प्रकृति, अवशेषों के प्रकार और स्तंभ की सामग्री पर आधारित होना चाहिए। आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले सॉल्वैंट्स में मेथनॉल, इथेनॉल, एसीटोन, डाइक्लोरोमेथेन, हेक्सेन, आदि शामिल हैं। इन सॉल्वैंट्स में अवशेषों को प्रभावी ढंग से हटाने और जल्दी से वाष्पशील करने के लिए अच्छी घुलनशीलता और अस्थिरता होनी चाहिए।
सफाई डिवाइस तैयार करें
क्लीनिंग डिवाइस में आमतौर पर एक क्रोमैटोग्राफिक पंप, कनेक्टिंग पाइप, अपशिष्ट तरल संग्रह की बोतल, आदि शामिल हैं, सुनिश्चित करें कि सफाई इकाई साफ और लीक-मुक्त है, और आवश्यक कनेक्टर और सील तैयार हैं।
सफाई चरण
निकालें स्तंभ
सफाई से पहले, पहले क्रोमैटोग्राफ से कॉलम को हटा दें। ऑपरेशन के दौरान दृढ़ता से खींचने से बचने के लिए ध्यान दें, ताकि इंटरफ़ेस को नुकसान न हो या कॉलम को मोड़ने का कारण न हो।
दूषित भागों को हटा दें
कॉलम के सामने के छोर से एक दूषित खंड को हटाने के लिए एक काटने वाले उपकरण का उपयोग करें (यानी नमूना के पास अंत)। हटाने की लंबाई आमतौर पर संदूषण की डिग्री और स्तंभ की लंबाई से निर्धारित होती है, और यह आमतौर पर 0 के बारे में हटाने के लिए अनुशंसित है। 5 मीटर। इस कदम का उद्देश्य कलंक के संभावित दूषित वर्गों को हटाना और बाद की सफाई प्रक्रिया की प्रभावशीलता सुनिश्चित करना है।
सफाई डिवाइस कनेक्ट करें
रिसाव के बिना तंग कनेक्शन सुनिश्चित करने के लिए कॉलम को सफाई इकाई से कनेक्ट करें। यह सुनिश्चित करने के लिए कनेक्ट करते समय कॉलम की दिशा पर ध्यान दें कि सफाई विलायक सुचारू रूप से कॉलम से गुजर सकता है।
सफाई विलायक और प्रवाह दर चुनें
स्तंभ की सामग्री और अवशेषों की प्रकृति के अनुसार उपयुक्त सफाई विलायक का चयन करें। विलायक इंजेक्शन से पहले एक क्रोमैटोग्राफिक पंप का उपयोग करके एक उपयुक्त प्रवाह दर पर कॉलम में पंप किया जाता है। प्रवाह दर का विकल्प स्तंभ के विनिर्देशों और सफाई विलायक की चिपचिपाहट पर आधारित होना चाहिए, और यह आमतौर पर स्तंभ के अधिकतम प्रवाह दर के 80% के भीतर नियंत्रित करने के लिए अनुशंसित है।
फ्लश स्तंभ
क्रोमैटोग्राफिक पंप को चालू करें और एक निरंतर प्रवाह दर पर कॉलम के माध्यम से सफाई विलायक को फ्लश करें। फ्लशिंग समय स्तंभ के संदूषण की डिग्री और सफाई विलायक के प्रभाव पर आधारित होना चाहिए, और यह आम तौर पर फ्लश करने की सिफारिश की जाती है जब तक कि प्रवाह स्पष्ट और पारदर्शी न हो। फ्लशिंग प्रक्रिया के दौरान, सफाई प्रभाव को बेहतर बनाने के लिए सफाई विलायक को समय पर बदला जा सकता है।
सफाई प्रभाव की जाँच करें
सफाई पूरी होने के बाद, कॉलम को क्रोमैटोग्राफ पर वापस पुनर्स्थापित किया जाता है और आवश्यक प्रदर्शन परीक्षण किए जाते हैं। सफाई से पहले और बाद में क्रोमैटोग्राम की तुलना करके, आप मूल्यांकन कर सकते हैं कि क्या सफाई प्रभाव संतोषजनक है। यदि अभी भी अवशेष या खराब प्रदर्शन हैं, तो सफाई प्रक्रिया को दोहराया जा सकता है या एक नया कॉलम बदला जा सकता है।
सफाई सावधानियां
उच्च उबलते बिंदु सॉल्वैंट्स का उपयोग करने से बचें:
उच्च उबलते बिंदु विलायक को क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में अस्थिर करना मुश्किल है, और बाद के विश्लेषण को प्रभावित करते हुए कॉलम में रहना आसान है। इसलिए, सफाई प्रक्रिया में उच्च उबलते बिंदु सॉल्वैंट्स के उपयोग से बचने का प्रयास करना चाहिए।
विलायक की गलतफहमी पर ध्यान दें:
सफाई विलायक को प्रतिस्थापित करते समय, सुनिश्चित करें कि बाद में इस्तेमाल किया गया विलायक वर्षा या परिसीमन से बचने के लिए पिछले विलायक के साथ गलत है।
नियंत्रण फ्लश दबाव:
फ्लशिंग प्रक्रिया के दौरान, स्तंभ को नुकसान से बचने के लिए स्तंभ की सहिष्णुता सीमा के भीतर फ्लशिंग दबाव को नियंत्रित किया जाना चाहिए।
नियमित रूप से नमूना पैड और गैसकेट बदलें:
सैंपल पैड और गैसकेट क्रोमैटोग्राफ के हिस्से हैं जो उम्र बढ़ने और क्षति के लिए प्रवण हैं। इन घटकों का नियमित प्रतिस्थापन रिसाव और संदूषण से बच सकता है और क्रोमैटोग्राफिक विश्लेषण की सटीकता सुनिश्चित कर सकता है।
सफाई प्रक्रिया रिकॉर्ड करें:
प्रत्येक सफाई के बाद, सफाई प्रक्रिया, विलायक का उपयोग किया गया, फ्लशिंग समय और अन्य जानकारी बाद के विश्लेषण और ट्रेसबिलिटी के लिए दर्ज की जानी चाहिए।
सारांश
लघु स्तंभ क्रोमैटोग्राफी की सफाई समस्या पृथक्करण दक्षता, स्तंभ जीवन और विश्लेषण सटीकता से संबंधित एक महत्वपूर्ण लिंक है। सही सफाई विलायक का चयन करके, फ्लशिंग दबाव और प्रवाह दर को नियंत्रित करते हुए, विलायक की गलतफहमी पर ध्यान देना, और नियमित रूप से नमूना पैड और गैसकेट को बदलते हुए, स्तंभ में अवशेषों को प्रभावी ढंग से हटाया जा सकता है और इसके सेवा जीवन को बढ़ाया जा सकता है। इसी समय, सफाई प्रक्रिया का दस्तावेजीकरण करना भी विश्लेषणात्मक सटीकता और ट्रेसबिलिटी सुनिश्चित करने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है।
वास्तविक संचालन में, उचित सफाई विधि और विलायक को स्तंभ की सामग्री, प्रदूषण की डिग्री और प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार चुना जाना चाहिए। विभिन्न प्रकार के अवशेषों और दूषित पदार्थों के लिए विभिन्न सफाई रणनीतियों और विलायक संयोजनों की आवश्यकता हो सकती है। इसलिए, जब लघु कॉलम क्रोमैटोग्राफी की सफाई की जाती है, तो कॉलम इंस्ट्रक्शन मैनुअल और ऑपरेटिंग गाइड को संदर्भित करने की सिफारिश की जाती है, और वास्तविक स्थिति के अनुसार लचीले ढंग से समायोजित किया जाता है।
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