रिवर्स कॉलम क्रोमैटोग्राफी
2. क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (रोटेशन प्रकार)
3. क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (मैनुअल)
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विवरण
तकनीकी पैरामीटर
रिवर्स कॉलम क्रोमैटोग्राफी, जिसे उलट-चरण क्रोमैटोग्राफी के रूप में भी जाना जाता है, विश्लेषणात्मक और तैयारी केमिस्ट्री में एक व्यापक रूप से नियोजित तकनीक है, विशेष रूप से जैव रसायन और प्रोटिओमिक्स के क्षेत्र में .} यह विधि गैर-ध्रुवीय या हाइड्रोफोबिक गुणों के साथ एक स्थिर चरण का उपयोग करती है, जैसे कि अल्किल चेन्स (सामान्य रूप से C8, C18) कार्बनिक संशोधक जैसे एसिटोनिट्राइल या मेथनॉल .
अलगाव सिद्धांत मोबाइल और स्थिर चरणों . के बीच एनालिटिक्स के अंतर घुलनशीलता पर टिका हुआ है क्योंकि मोबाइल चरण रचना धीरे-धीरे अधिक कार्बनिक हो जाती है, उच्च हाइड्रोफोबिसिटी के साथ विश्लेषण स्थिर चरण के साथ अधिक दृढ़ता से बातचीत करते हैं, जो अधिक ध्रुवीय यौगिकों की तुलना में विलंबित होता है, जो कि अधिक ध्रुवीय यौगिकों की तुलना में होता है। प्रोटीन, पेप्टाइड्स और अन्य बायोमोलेक्यूलस को शुद्ध करने के लिए .
पैरामीटर



अनुप्रयोग
जीवविज्ञान
रिवर्स चरण क्रोमैटोग्राफी (आरपीसी) जटिल प्रोटीन मिश्रणों को अलग करने के लिए एक अत्यधिक प्रभावी तरीका है, जैसे कि सीरम . तकनीक स्थिर चरण की गैर-ध्रुवीय प्रकृति और मोबाइल चरण की ध्रुवीय प्रकृति का लाभ उठाती है ताकि प्रोटीन और स्थिर चरण {{2} के बीच हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन के आधार पर पृथक्करण प्राप्त हो सके।
आरपीसी की उच्च दक्षता और चयनात्मकता स्टेम अपने हाइड्रोफोबिक गुणों में सूक्ष्म अंतर के साथ प्रोटीन को हल करने की अपनी क्षमता से .} यह जैविक नमूनों से विशिष्ट प्रोटीन को अलग करने और शुद्ध करने के लिए एक आदर्श विकल्प बनाता है, जहां शुद्धता और उपज महत्वपूर्ण हैं .}
सीरम पृथक्करण के संदर्भ में, आरपीसी का उपयोग व्यक्तिगत प्रोटीन या प्रोटीन अंशों को अलग करने के लिए किया जा सकता है, जो कि स्थिर चरण . के लिए उनके बाध्यकारी आत्मीयता के आधार पर मोबाइल चरण संरचना और प्रवाह दर का ध्यान से चुनकर, शोधकर्ता संगत प्रोटीन के पृथक्करण की स्थिति को अनुकूलित कर सकते हैं {{2}
आरपीसी स्केलेबल होने का लाभ भी प्रदान करता है, जिससे यह प्रयोगशाला-स्केल प्रोटीन शुद्धि और बड़े पैमाने पर उत्पादन प्रक्रियाओं . दोनों के लिए उपयुक्त हो जाता है, इसके अलावा, आरपीसी कॉलम को आसानी से पुन: उपयोग किया जा सकता है और पुनर्जीवित किया जा सकता है, लागत को कम करना और अपशिष्ट . .
सारांश में, आरपीसी जटिल प्रोटीन मिश्रण को अलग करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है, जैसे कि सीरम, और इसकी उच्च दक्षता और चयनात्मकता इसे जैविक नमूनों से विशिष्ट प्रोटीन को अलग करने और शुद्ध करने के लिए एक उत्कृष्ट विकल्प बनाती है .
दवा उद्योग
रिवर्स चरण क्रोमैटोग्राफी (आरपीसी) दवा उद्योग में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, विशेष रूप से दवाओं के पृथक्करण और शुद्धि में, जिसमें एंटीकैंसर ड्रग्स और एंटीबायोटिक्स शामिल हैं .
दवाओं की शुद्धता और गुणवत्ता उनकी प्रभावकारिता और सुरक्षा के लिए सर्वोपरि है . rpc जटिल मिश्रणों से दवाओं को अलग करने और शुद्ध करने के लिए एक अत्यधिक कुशल और चयनात्मक विधि प्रदान करता है, यह सुनिश्चित करता है कि अंतिम उत्पाद कठोर गुणवत्ता मानकों को पूरा करता है .}
आरपीसी दवा के अणुओं और स्थिर चरण . के बीच हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन में अंतर का उपयोग करके काम करता है, मोबाइल चरण संरचना और प्रवाह दर को समायोजित करके, शोधकर्ता संदूषण . को कम करते हुए लक्ष्य दवा की शुद्धता और उपज को अधिकतम करने के लिए अलगाव की स्थिति को दर्जी कर सकते हैं।
एंटीकैंसर ड्रग्स और एंटीबायोटिक दवाओं के मामले में, आरपीसी विशेष रूप से मूल्यवान है क्योंकि इन दवाओं में अक्सर संकीर्ण चिकित्सीय खिड़कियां होती हैं और अशुद्धियों के प्रति अत्यधिक संवेदनशील होती हैं . आरपीसी की पवित्रता और चयनात्मकता को प्राप्त करने की क्षमता इन महत्वपूर्ण दवाओं की गुणवत्ता और सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए एक आदर्श विकल्प बनाती है .
इसके अलावा, आरपीसी सॉल्वैंट्स और स्थिर चरणों की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ संगत है, विभिन्न दवाओं के लिए पृथक्करण की स्थिति को अनुकूलित करने में लचीलेपन की अनुमति देता है . यह आरपीसी को दवा उद्योग में दवा शुद्धि के लिए एक बहुमुखी और विश्वसनीय उपकरण बनाता है .}
सारांश में, आरपीसी दवाओं के पृथक्करण और शुद्धि के लिए दवा उद्योग में एक आवश्यक तकनीक है, जिसमें एंटीकैंसर ड्रग्स और एंटीबायोटिक्स . शामिल हैं। इन दवाओं की शुद्धता और गुणवत्ता सुनिश्चित करने की इसकी क्षमता उनकी प्रभावकारिता और सुरक्षा के लिए महत्वपूर्ण है .}
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खाद्य विश्लेषण
रिवर्स चरण क्रोमैटोग्राफी (आरपीसी) विभिन्न हाइड्रोफोबिकिटी के साथ यौगिकों को अलग करने और विश्लेषण करने के लिए खाद्य विश्लेषण में एक मूल्यवान तकनीक है, जैसे कि प्रोटीन, शर्करा और लिपिड .
खाद्य उद्योग में, भोजन के नमूनों की संरचना को समझना गुणवत्ता नियंत्रण, पोषण लेबलिंग के लिए महत्वपूर्ण है, और नियामक मानकों के साथ अनुपालन सुनिश्चित करना . rpc इन घटकों को अलग करने और मात्रा में करने का एक अत्यधिक प्रभावी साधन प्रदान करता है, सटीक और विश्वसनीय विश्लेषण .}
आरपीसी एनालिटिक्स और स्थिर चरण . के बीच हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन में अंतर का फायदा उठाते हुए काम करता है, जो मोबाइल चरण संरचना और प्रवाह दर का सावधानीपूर्वक चयन करके, शोधकर्ताओं को अलग -अलग परिस्थितियों को पूरा करने के लिए लक्ष्य यौगिकों के पृथक्करण की स्थिति को दर्जी कर सकते हैं, जबकि नमूना . में अन्य घटकों से हस्तक्षेप को कम करते हैं।
उदाहरण के लिए, प्रोटीन, शर्करा और लिपिड के मामले में, आरपीसी का उपयोग इन यौगिकों को उनके सापेक्ष हाइड्रोफोबिसिटी . के आधार पर अलग और मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।
आरपीसी विशेष रूप से भोजन के नमूनों में दूषित पदार्थों या मिलावट का पता लगाने के लिए भी उपयोगी है . एक भोजन के नमूने के घटकों को अलग और विश्लेषण करके, आरपीसी अवांछित पदार्थों की उपस्थिति की पहचान करने में मदद कर सकता है, जैसे कीटनाशकों, भारी धातुओं, या अनौपचारिक योजक .} .}
सारांश में, आरपीसी अलग -अलग हाइड्रोफोबिसिटी के साथ यौगिकों को अलग करने और विश्लेषण करने के लिए खाद्य विश्लेषण में एक शक्तिशाली उपकरण है, जैसे कि प्रोटीन, शर्करा, और लिपिड . भोजन के नमूनों की संरचना के बारे में सटीक और विश्वसनीय जानकारी प्रदान करने की इसकी क्षमता खाद्य गुणवत्ता नियंत्रण, पोषण संबंधी लेबलिंग के लिए आवश्यक है {} {1}
रसायन विज्ञान
रिवर्स कॉलम क्रोमैटोग्राफीएक बहुमुखी तकनीक है जो विभिन्न रासायनिक यौगिकों के पृथक्करण में आवेदन पाता है, विशेष रूप से अलग -अलग ध्रुवों के साथ .
आरपीसी विश्लेषणों और स्थिर चरण . के बीच हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन में अंतर का फायदा उठाते हुए काम करता है
आरपीसी के प्रमुख लाभों में से एक सॉल्वैंट्स और शर्तों की एक विस्तृत श्रृंखला को संभालने की क्षमता है . यह बहुमुखी प्रतिभा शोधकर्ताओं को विभिन्न रासायनिक यौगिकों के लिए अलगाव की स्थिति को अनुकूलित करने की अनुमति देती है, यह सुनिश्चित करना कि पृथक्करण दोनों कुशल और प्रभावी है .
उदाहरण के लिए, आरपीसी का उपयोग अलग -अलग सॉल्वैंट्स, उनके आणविक भार, या उनके रासायनिक संरचना . में उनकी घुलनशीलता के आधार पर यौगिकों को अलग करने के लिए किया जा सकता है, जो मोबाइल चरण संरचना, प्रवाह दर और स्थिर चरण का सावधानीपूर्वक चयन करके, शोधकर्ताओं को अलग -अलग परिस्थितियों में विभाजित कर सकते हैं, जबकि नमूना {1 में अन्य घटकों से हस्तक्षेप को कम करने के लिए अलगाव की स्थिति को बढ़ा सकते हैं।
आरपीसी विभिन्न डिटेक्शन विधियों के साथ उपयोग के लिए भी अत्यधिक अनुकूलनीय है, जैसे कि यूवी-वीआईएस स्पेक्ट्रोस्कोपी, मास स्पेक्ट्रोमेट्री, या अपवर्तक सूचकांक का पता लगाने के लिए . यह लक्ष्य यौगिकों के संवेदनशील और चयनात्मक पहचान के लिए अनुमति देता है, यहां तक कि कम सांद्रता . भी
सारांश में, आरपीसी विभिन्न रासायनिक यौगिकों को अलग करने के लिए एक बहुमुखी तकनीक है, विशेष रूप से अलग -अलग ध्रुवीयताओं के साथ . सॉल्वैंट्स और स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला को संभालने की क्षमता, अलग -अलग पता लगाने के तरीकों के साथ इसकी संगतता के साथ संयुक्त है, यह विभिन्न रासायनिक पृथक्करणों के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बनाता है .}
विलायक चयन का प्रभाव
मेंरिवर्स कॉलम क्रोमैटोग्राफी, विलायक चयन एक महत्वपूर्ण कदम है, जिसका पृथक्करण दक्षता, शिखर आकार, पता लगाने की संवेदनशीलता और क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के जीवनकाल पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है .
पृथक्करण प्रभाव पर प्रभाव

विलायक प्रकार और चयनात्मकता
विभिन्न प्रकार के सॉल्वैंट्स में अलग -अलग रासायनिक गुण होते हैं, जो नमूने में विभिन्न घटकों के साथ उनकी बातचीत को प्रभावित करेंगे, जिससे अलगाव की चयनात्मकता को बदलना . उदाहरण के लिए, जब मेटा और पैरा आइसोमर्स का विश्लेषण किया जाता है, तो नहीं एसिटोनिट्राइल सिस्टम . हालांकि, मेथनॉल के साथ एसिटोनिट्राइल को बदलने के बाद, दो लक्ष्यों के शिखर आकार अच्छे थे और पूर्ण पृथक्करण को प्राप्त किया जा सकता है . यह इंगित करता है कि विलायक प्रकार में परिवर्तन से अलग-अलग सॉल्यूशन को अलग-अलग तरह से प्रभावित किया जा सकता है। पाया .
विलायक शक्ति और संकल्प
विलायक शक्ति एक विलायक की तीव्रता को समायोजित करके एक क्रोमैटोग्राफिक कॉलम . से एक नमूने को कम करने के लिए एक विलायक की क्षमता को संदर्भित करती है, नमूने में प्रत्येक घटक के प्रतिधारण समय को बदला जा सकता है, जिससे रेजोल्यूशन को प्रभावित किया जा सकता है . उल्टा-हल्के-चरण के रूप में उपयोग किया जाता है। तीव्रता . एसिटोनिट्राइल की क्षालन क्षमता मेथनॉल . की तुलना में थोड़ी मजबूत होती है, जब एक ही अनुपात में पानी के साथ मिलाया जाता है, तो यह नमूना को अधिक प्रभावी ढंग से . को संकल्प समीकरण के अनुसार बढ़ा सकता है, जो कि सॉल्वेंट को प्रभावित कर सकता है, जबकि सॉल्वेंट को बदल सकता है। प्रभाव .

शिखर आकार पर प्रभाव
असामान्य विलायक क्षालन तीव्रता और शिखर आकार
नमूना विलायक की क्षालन तीव्रता का शिखर आकार . पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव होता है जब मोबाइल चरण की तुलना में एक विलायक या समाधान में काफी अधिक elution तीव्रता के साथ उपयोग किया जाता था, यह विघटन के लिए उपयोग किया जाता है, तो यह अक्सर पीक फ्रंट . के लिए कम हो जाने वाली समस्याओं जैसे कि समस्याओं की ओर ले जाती है=40: 60.} यदि क्लोरैमफेनिकॉल को मेथनॉल में भंग कर दिया गया था, तो प्लेट की गिनती 32 से कम थी, 000 /m . बाद में, मोबाइल चरण का उपयोग विघटन के लिए किया गया था, और प्लेट की गिनती 90,000 {9}000 {9} {9} {9} {9} {9} {9} {8} { एल्यूशन सैंपल विलायक स्थानीय रूप से मोबाइल चरण की क्षालन तीव्रता को बढ़ाता है, जिससे एक ही घटक के सामने और पीछे के हिस्सों के बीच असंगत प्रतिधारण होता है (सामने का हिस्सा तेजी से चलता है और पीछे का हिस्सा धीमा होता है), जो बदले में क्षेत्रीय चौड़ीकरण की ओर जाता है और शिखर आकार . को प्रभावित करता है .}
विलायक और मोबाइल चरण के बीच संगतता
विलायक और मोबाइल चरण के बीच खराब संगतता भी असामान्य शिखर आकृतियों . को जन्म दे सकती है, यदि विलेय के लिए उपयोग किए जाने वाले विलायक में मोबाइल चरण के साथ खराब संगतता होती है, और बेंजीन, जिसमें मोबाइल चरण के साथ खराब संगतता होती है, का उपयोग नमूना सॉल्वैंट्स के रूप में किया जाता है, विलेय सीधे विलेय को कवर कर सकता है, क्रोमैटोग्राफी . की प्रारंभिक अवधारण प्रक्रिया को दरकिनार कर सकता है।
पता लगाने की संवेदनशीलता पर प्रभाव
सॉल्वैंट्स का पराबैंगनी अवशोषण
विलायक की पराबैंगनी अवशोषण विशेषताएं पराबैंगनी क्षेत्र में . का पता लगाने की संवेदनशीलता को प्रभावित करेंगी, विशेष रूप से सुदूर पराबैंगनी क्षेत्र (200 एनएम के करीब), एसीटोनिट्राइल का अवशोषण मेथनॉल की तुलना में बहुत कम है {3} उपयोग किया जाता है, एसिटोनिट्राइल के कारण होने वाली बेसलाइन बहाव मेथनॉल . की तुलना में बहुत छोटा होता है, जब एसिटोनिट्राइल का उपयोग मोबाइल चरण के रूप में किया जाता है, तो परिणामी क्रोमैटोग्राम न केवल सौंदर्यवादी रूप से सुखदायक होता है, बल्कि 210 के लिए कम से कम का पता लगाने के लिए बहुत कम पता लगाने की सीमा होती है। एसीटोनिट्राइल जैसे तरंग दैर्ध्य को बेसलाइन शोर को कम करने और पता लगाने की संवेदनशीलता को बढ़ाने के लिए चुना जाना चाहिए .
विलायक की पवित्रता
विलायक की शुद्धता का पता लगाने की संवेदनशीलता पर भी प्रभाव पड़ता है . क्रोमैटोग्राफिक ग्रेड सॉल्वैंट्स का उपयोग डिटेक्टर पर अशुद्धियों के हस्तक्षेप को कम करने के लिए अधिक से अधिक किया जाना चाहिए {. गैर-क्रोमैटोग्राफिक शुद्ध सॉल्वैंट्स में अशुद्धता का पता लगाने में वृद्धि हो सकती है।
क्रोमैटोग्राफिक स्तंभों के जीवनकाल पर प्रभाव
विलायक की ध्रुवीयता
विलायक की ध्रुवीयता का क्रोमैटोग्राफिक कॉलम . के जीवनकाल पर एक निश्चित प्रभाव होता है, जैसे कि मेथनॉल, पानी और ग्लेशियल एसिटिक एसिड जैसे मजबूत ध्रुवीयता के साथ पदार्थ सिलिका जेल पैक किए गए स्तंभों को नुकसान पहुंचा सकते हैं, जबकि कम ध्रुवीयता जैसे कि एन-ब्यूटेनोल और डाइक्लोरोमेथेन को नुकसान पहुंचा सकता है। रेजिन क्रोमैटोग्राफिक कॉलम, और अम्लीय समाधानों को नुकसान पहुंचाने के लिए प्रवण होता है, जो कि सिलिका जेल के आधार पर पैकिंग सामग्री का उपयोग करते समय हो सकता है, जब मोबाइल चरण . के पीएच रेंज पर ध्यान देना आवश्यक होता है, तो यह आवश्यक है कि वह 2 और {7} के बीच है। बंधुआ चरण . जब पीएच मान 7 से अधिक होता है, तो सिलिका जेल विघटन के लिए प्रवण होता है . बफर समाधान स्थिर चरण के लगातार उपयोग के लिए गिरावट की आवश्यकता होती है .}
विलायक की शुद्धता और अशुद्धियाँ
विलायक में निहित ट्रेस अघुलनशील अशुद्धता कणों को समय के साथ क्रोमैटोग्राफिक कॉलम . के सिर पर आसानी से बनाए रखा जा सकता है, यह क्रोमैटोग्राफिक कॉलम के यांत्रिक रुकावट की ओर जाता है, जिससे स्तंभ के दबाव में वृद्धि होती है और यह सामान्य रूप से उपयोग करना असंभव हो जाता है, जिससे क्रोमैटोग्राफिक कॉलम {1} . का उपयोग करें
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